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        看ELISA試劑盒如何檢測絲蟲抗體

        2013-09-27 [1267]

        絲蟲?。╢ilariasis)在我國是由斑氏和馬來絲蟲寄生于人體淋巴系統(tǒng)所引起的慢性寄生蟲病,通過蚊蟲傳播。早期臨床特征主要為淋巴管炎和淋巴結(jié)炎,晚期為淋巴管阻塞形成象皮腫。常用的檢查方法是用ELISA試劑盒檢測絲蟲抗體。
        [臨床意義] 絲蟲病潛伏期4個月至15年,平均1年左右。流行區(qū)可有50%-75%的“無癥狀”感染者。ELISA法檢測絲蟲抗體陽性可對該病進行確診,陰性不能排除絲蟲病感染。
        1.急性期 突出癥狀為淋巴結(jié)炎、淋巴管炎、精囊炎、絲蟲熱等。
        2.慢性期 由于炎癥反復(fù)發(fā)作,使淋巴管和淋巴結(jié)因增生的肉芽組織阻塞,出現(xiàn)*的臨床癥狀和體征。
        [檢測方法] ELISA試劑盒
        [方法學(xué)原理] 將微絲蚴固定在玻片上制成固相抗原片,加入待檢血清和酶標記抗體后,若待檢血清中存在相應(yīng)抗體,則形成的抗原抗體復(fù)合物附著在玻片上。加入相應(yīng)底物后顯色,在顯微鏡下進行觀察。
        [標本準備] 不抗凝靜脈血2ml。
        [試劑]
        1.微絲蚴固相抗原片
        2.底物溶液
        3.0.2mol/LpH7.6硼酸緩沖液
        4.HRP-抗人IgG
        5.洗滌液與稀釋液
        [ELISA試劑盒檢測步驟]
        1.于抗原點片上滴加1:40和1:80稀釋的待檢血清,在37C環(huán)境中濕盒2h。
        2.流水沖去多余血清后于洗滌液中浸洗3次,每次5min。
        3.滴加zui適濃度HRP-抗人IgG,在37℃環(huán)境中濕盒1h。
        4.流水沖去多余血清后于洗滌液中浸洗3次,每次5min。
        5.滴加底物1滴于低倍顯微鏡下觀察。
        [結(jié)果觀察] 觀察200條微絲蚴,反應(yīng)結(jié)果判定如下。
        3+ >95%微絲蚴呈棕色或橙色;
        2+ ≥50%微絲蚴呈棕色或橙色;
        1+ ≥5%微絲蚴呈棕色、橙色或淺棕色;
        ± <5%微絲蚴呈淺棕色或橙色;
        一 微絲蚴無色或稍呈淺。
        凡血清1:40和1:80均為陽性反應(yīng)(+一+++)者,定為陽性;1:40為“+”或“土”,定為可疑;1:40為“-”者定為陰性。
        [參考范圍] 絲蟲抗體陰性
        [ELISA試劑盒檢測注意事項]
        1.試驗前試劑應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min。
        2.洗滌時應(yīng)注意不能將玻片上的固相抗原沖掉。